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高手看进来,一个比较棘手的问题!!!

发布于 2003-08-13 · 浏览 2058 · IP 北京北京
这个帖子发布于 21 年零 270 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
现在有一个用Ecoli表达的90个aa左右的蛋白项目,接过来时他们是用PET系统的GST融合表达的。我想可能是由于这个蛋白的亲水性不高,不好复性,所以在构建时把基因放在了GST后面,这样表达就成了可溶性的了。写信问之,得到的回答也差不多。现在碰到的问题是,他们用的载体系统最后纯化时要用EK来切,这样成本肯定很高。我想做几个选择:

1)我想做个小小改动把基因移到Thromin位点后面,在我的了解范围我认为这样应该不会影响表达和活性,但不是很确信。
2)如果不做融合表达,90个aa左右的疏水性蛋白包涵体复性是不是不太可能?如果可能的话我想用这个方案是最好的了。
3)如果是第一种方案,上临床的话Thromin一定要去除吗?为了除Thromin是否可以用载体上的C端的His-Tag?这样的话有一个C端His-Tag的蛋白会对临床的报批和效果是否有影响?

谢谢大家!





最后编辑于 2003-08-13 · 浏览 2058

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