【求助】免疫荧光protocal。急！

最近在做细胞的免疫荧光，可不知道怎么回事，老是观察不到，只能看到些

非特异性的点。

我的步骤：细胞贴壁于12孔板，弃去培养液，pbs洗一次。
1、4%甲醛 4度固定30min
2、加含0.1%tritonx-100的1%脱脂奶粉10分钟
3、1%脱脂奶粉洗3次
4、1：200稀释的一抗37度温育4小时（摇床）。
5、1%脱脂奶粉洗3次。
6、二抗37度温育2小时，用锡箔纸包被（摇床）。
7、1%脱脂奶粉洗三次。pbs洗两次。
8、荧光显微镜观察。

所有试剂的配制都是用0.1M的PBS.

请教各位，大家都是怎么做的阿？能不能发给我个protocal?
我的PROTOCAL中存在什么问题啊？