用293T细胞做新冠S蛋白瞬时转染可行吗?

老板想让新冠S蛋白的质粒瞬时转染到293T细胞中表达S蛋白，用WB验证。

结果转染时间24h ,48h,72h都不成功

用的是碧云天的质粒，载体是pcDNA3.1,启动子是pCMV，转染试剂用PEI，转2ug左右。S蛋白是wuhan-hu原始株密码子未优化，质粒序列没有问题，质量也是达标，A260/A280在2.0左右，A260/A230在2以上。

WB不论是我做还是更有经验的师兄师姐做都跑不出来条带，WB电泳胶有6％～10％都试过，电泳80到120V恒压，转膜300ma,115到180min都试过，一抗4°过夜，洗膜3次10分钟，二抗1小时孵，再洗膜重复3次10分钟，最后曝光

结果什么都没有。。。。白膜一张或者只有非特异性条带。。。。。。

如果各位大佬有好的解决办法，麻烦可以标价下原因和参考文献吗？真的没招了谢谢