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【讨论】针对药典色谱柱使用方面的问题，谈谈个人体会

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楼主

丁香园版主

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1楼

这个帖子发布于9年零127天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

最近发现很多在用药典的方法的时候出现色谱条件无法重现的问题，针对这样的问题，个人觉得主要还是问题在色谱柱上面，我就简单说说这个色谱柱：
1.目前色谱柱或叫分析柱其品种真是太多了，就说普通的C18色谱柱吧，也是有很多种，具体的品种就不说了，而实质上如同我们做仿制药，由于其工艺不同，或是技术不同，所含的杂质不同,或是说碳含量，封尾技术等的不同，对于相同流动相下其对药物的色谱行为差别还是很大的，有的甚至是不出峰
2.装填技术：简单说来对于一些常规的物质，一般的装填技术都是能够得到对物质的分离，但是对于某些特殊的物质及杂质，不同层次的装填技术所产生的效果是有差异的，可以说会出现这个厂家能分离这个杂质，而所谓的名厂的色谱柱反而不能得到很好的分离
3.碳含量：碳含量的多少、种类、纯度、大小等都是影响到其色谱行为，特别是保留时间问题
4.柱效：由于受多种因素的影响，应该说柱效更是差别各异，有的会出现柱效很高，但是却杂质分不开，如果某药物具有特异性，柱效一下降，基本是杂质与主峰完全重叠了
5.键合物：目前色谱厂家都有自己的一个研究小团队，可以根据客户的要求，定制一些专门的色谱柱来分析一些特殊的药物，而普通的常规的色谱柱是不能达到要求，这也是药典上很多不能重现的一个因素，可能出于保护吧，未写入药典，虽然规定了是某某柱子，其实还是有讲究在里面，如果不能够仔细分析研究对比以及使用一些途径的话，问题能够解决，但是需要花大量的时间、金钱等，所以不可闷头做实验，也要适当转变思路
6.厂家：个人认为不要迷信所谓的大厂名厂，色谱柱的东西，不是越贵越好，应该说适合的最好。至于如何适合，应该多多与色谱柱厂家沟通，你有些不知道的因素也是你卡的地方，在色谱柱厂家的一句中或许就能得到答案，现在资源很丰富，要充分利用网络资源，人力资源等
7.粒径：也是应该考虑的一个因素，他会影响其保留时间，以及出峰顺序等
8.长短：目前药典上用到超短柱的现象，比如33mm等，如果我们其他条件不变，而使用其他普通长度的色谱柱，基本上问题很多，不是分不开，就是出现鬼峰等，其实就是制标厂家设的卡，是一般的厂家不可轻易重现，当然也是有其自身的优点就是短、频、快，有利于产品后期的质量检验工作，这应该说也是一个趋势吧，作为研发部门，我们不应该仅仅是为了能够得到很好的色谱行为图，应该要引入后期的检验工作提供便利的概念。因为如果使用250mm的色谱，有关物质运行40min左右，对于检验工作来说还是不小的时间量。说一个ELSD利用的例子：某产品，有三个主要杂质，均为外标法，而使用ELSD的战友都知道，一般采用三点随行标曲，加上含量测定对照标样，光进对照品所需要的时间就是不小啊，大家可以去计算，再加上3+2，有关物质1+1，后面还要补针等因素，还有如果还要做系统适应性试验，加起来，呵呵
10.pH:不同的pH还是差别很大的，对于那些特殊要求的，一定要使用宽范围的，否则，柱子的寿命，1周，1月，3月，很难说啊，所以一定要看清楚，搞明白，pH是否影响其色谱行为
11.纯水柱：目前药典已经有使用纯水柱的，也就是没有使用有机相或是用很少。如果我们用不耐纯水的色谱柱，柱子的寿命基本上很短，少则1月，多则3-4月就报废，出现的主要问题就是发现保留时间怎么越来越短了？当然本人经验少，不可预知的情况很多，反正就是不耐用，所以当我们发现怎么使用纯水的流动相（当然里面可能加盐类物质），不要惊奇，赶紧去采购相应的分析柱吧，别去使用手头常规的色谱柱，钱多的另算
12.耐压：也许会发现药典上使用非一般的流速，比如1.5,2，3等，而发现我们的液相怎么就不耐压，流速一上去就不行了，蹦掉了，漏液了，色谱峰变形了。。。。。不要奇怪，除了使用非一般的液相外，还有就是柱子的问题，压力大了，色谱行为大大变化
13.其他因素：
1）保养：一根新购的良好的色谱柱，其各个性能是最好的，随着使用的时间，频率等寿命都是会下降的，如同人的寿命一样，不会长命万岁，只会有长命百岁，这里面就是会不会使用，会不保养的问题了，平时注意养生的话，身体健康，长命百岁，但是如果抽烟喝酒熬夜jjww的话，很难说，应该说色谱柱是3分用7分养。首先就是看厂家的说明书，一般正规的厂家都是有保养说明的，不要不看，如果是英文等，也要看看，很重要
2)再生：说明书也有说明，切忌盲目再生！
3）
4)
今天说的够多了，个人观点，也是本人看帖的一点分析与研究，非权威观点，当然也包括一些实战经验在里面，没有试验的支持，是不会有好的观点与讨论的，仅供大家参考
另外说明：绝对原创，除文字非本人

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2010-10-25 22:41 浏览 : 12984 回复 : 39

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111 编辑于 2011-05-12 19:47

• 上海学界发表重磅文章，反思新冠疫情中暴露出的十大问题

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songxinwb

常驻站友

17楼

C8和C18都是反相色谱柱的一种，适用于分析弱极性的物质，C8适合分析弱极性物质里极性稍强的一类物质，C18适合分析弱极性物质里极性更弱的物质。这是他们极性上的差别，但是差别并不是特别明显，一般能用C8分析的物质，在C18上也能分离。C18比C8的碳链更长，因此带来更好的保留特性。因此C8就更适合分析大分子类的物质，比如一些球蛋白等，都用C8和缓冲盐洗脱剂来配合使用。相反，分子量较小的物质，经常用C18来进行分析和分离。C18前面看到“ODS”的字样，ODS是英文octadecyl silane的缩写，意思是十八(烷)基硅烷，是以硅胶为基质键合的C18填料，由于大部分的C18柱都是硅胶基质，因此有时你还会看到色谱柱上只标称二者之一。其中以ODS居多。有时你还会看到ODS-x，x是不同的数字，这个x虽然是数字，但是不同厂家的产品代表的含义不同，一般以含碳量区分，但这也不是绝对的。有时还可能看到RP-18或RP-8，RP-18和C18意义基本一致，但是不同的厂家有不同的规定。**色谱柱用于快速分离混合极性样品，与C18和C8比较，疏水性小，通常可使用水相成分高洗脱液。在使用相同的流动相时，**和C8相比，对非极性化合物表现了更短的保留时间，对极性化合物没有明显影响。因此，对分离含极性范围广的混合物效果更好，丁基键合相能给出较短的分析时间和较高的分辨率。
建议大家做实验时最好购买同一厂家同一类型不同批号的色谱柱，在使用一根色谱柱建立方法后，可以考察下该方法在另一根柱子上的参数（如：保留时间，塔板数，对称应子等），并计算保留时间的偏差，如果<2%说明重现性较好。同时考察下在另一台仪器的使用情况，主要考察峰面积，因为不同仪器的检测器能量可能存在差异，我看国外一般考察其偏差<5%。
一点拙见，欢迎拍砖！

2010-11-22 00:35