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分析技术

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【讨论】针对药典色谱柱使用方面的问题,谈谈个人体会

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楼主 111
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丁香园版主

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这个帖子发布于10年零173天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近发现很多在用药典的方法的时候出现色谱条件无法重现的问题,针对这样的问题,个人觉得主要还是问题在色谱柱上面,我就简单说说这个色谱柱:
1.目前色谱柱或叫分析柱其品种真是太多了,就说普通的C18色谱柱吧,也是有很多种,具体的品种就不说了,而实质上如同我们做仿制药,由于其工艺不同,或是技术不同,所含的杂质不同,或是说碳含量,封尾技术等的不同,对于相同流动相下其对药物的色谱行为差别还是很大的,有的甚至是不出峰
2.装填技术:简单说来对于一些常规的物质,一般的装填技术都是能够得到对物质的分离,但是对于某些特殊的物质及杂质,不同层次的装填技术所产生的效果是有差异的,可以说会出现这个厂家能分离这个杂质,而所谓的名厂的色谱柱反而不能得到很好的分离
3.碳含量:碳含量的多少、种类、纯度、大小等都是影响到其色谱行为,特别是保留时间问题
4.柱效:由于受多种因素的影响,应该说柱效更是差别各异,有的会出现柱效很高,但是却杂质分不开,如果某药物具有特异性,柱效一下降,基本是杂质与主峰完全重叠了
5.键合物:目前色谱厂家都有自己的一个研究小团队,可以根据客户的要求,定制一些专门的色谱柱来分析一些特殊的药物,而普通的常规的色谱柱是不能达到要求,这也是药典上很多不能重现的一个因素,可能出于保护吧,未写入药典,虽然规定了是某某柱子,其实还是有讲究在里面,如果不能够仔细分析研究对比以及使用一些途径的话,问题能够解决,但是需要花大量的时间、金钱等,所以不可闷头做实验,也要适当转变思路
6.厂家:个人认为不要迷信所谓的大厂名厂,色谱柱的东西,不是越贵越好,应该说适合的最好。至于如何适合,应该多多与色谱柱厂家沟通,你有些不知道的因素也是你卡的地方,在色谱柱厂家的一句中或许就能得到答案,现在资源很丰富,要充分利用网络资源,人力资源等
7.粒径:也是应该考虑的一个因素,他会影响其保留时间,以及出峰顺序等
8.长短:目前药典上用到超短柱的现象,比如33mm等,如果我们其他条件不变,而使用其他普通长度的色谱柱,基本上问题很多,不是分不开,就是出现鬼峰等,其实就是制标厂家设的卡,是一般的厂家不可轻易重现,当然也是有其自身的优点就是短、频、快,有利于产品后期的质量检验工作,这应该说也是一个趋势吧,作为研发部门,我们不应该仅仅是为了能够得到很好的色谱行为图,应该要引入后期的检验工作提供便利的概念。因为如果使用250mm的色谱,有关物质运行40min左右,对于检验工作来说还是不小的时间量。说一个ELSD利用的例子:某产品,有三个主要杂质,均为外标法,而使用ELSD的战友都知道,一般采用三点随行标曲,加上含量测定对照标样,光进对照品所需要的时间就是不小啊,大家可以去计算,再加上3+2,有关物质1+1,后面还要补针等因素,还有如果还要做系统适应性试验,加起来,呵呵
10.pH:不同的pH还是差别很大的,对于那些特殊要求的,一定要使用宽范围的,否则,柱子的寿命,1周,1月,3月,很难说啊,所以一定要看清楚,搞明白,pH是否影响其色谱行为
11.纯水柱:目前药典已经有使用纯水柱的,也就是没有使用有机相或是用很少。如果我们用不耐纯水的色谱柱,柱子的寿命基本上很短,少则1月,多则3-4月就报废,出现的主要问题就是发现保留时间怎么越来越短了?当然本人经验少,不可预知的情况很多,反正就是不耐用,所以当我们发现怎么使用纯水的流动相(当然里面可能加盐类物质),不要惊奇,赶紧去采购相应的分析柱吧,别去使用手头常规的色谱柱,钱多的另算
12.耐压:也许会发现药典上使用非一般的流速,比如1.5,2,3等,而发现我们的液相怎么就不耐压,流速一上去就不行了,蹦掉了,漏液了,色谱峰变形了。。。。。不要奇怪,除了使用非一般的液相外,还有就是柱子的问题,压力大了,色谱行为大大变化
13.其他因素:
1)保养:一根新购的良好的色谱柱,其各个性能是最好的,随着使用的时间,频率等寿命都是会下降的,如同人的寿命一样,不会长命万岁,只会有长命百岁,这里面就是会不会使用,会不保养的问题了,平时注意养生的话,身体健康,长命百岁,但是如果抽烟喝酒熬夜jjww的话,很难说,应该说色谱柱是3分用7分养。首先就是看厂家的说明书,一般正规的厂家都是有保养说明的,不要不看,如果是英文等,也要看看,很重要
2)再生:说明书也有说明,切忌盲目再生!
3)
4)
今天说的够多了,个人观点,也是本人看帖的一点分析与研究,非权威观点,当然也包括一些实战经验在里面,没有试验的支持,是不会有好的观点与讨论的,仅供大家参考
另外说明:绝对原创,除文字非本人
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2010-10-25 22:41 浏览 : 15371 回复 : 39
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111 编辑于 2011-05-12 19:47
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snowgirl10
snowgirl10
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我转了,哈哈!!!
2010-10-25 23:19
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weeker
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放疗科
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关于色谱柱的研究,你们可以去搜索一下KIRKLAND的文献,他是以前杜邦公司,ZORBAX填料的高级工程师,30年以来他在色谱柱填料上的贡献是无与伦比的,关于不同条件下PH对于色谱行为以及色谱柱的影响,以及色谱柱的评价都有很深的研究。
2010-10-26 08:48
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楼主 111
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丁香园版主

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weeker
关于色谱柱的研究,你们可以去搜索一下KIRKLAND的文献,他是以前杜邦公司,ZORBAX填料的高级工程师,30年以来他在色谱柱填料上的贡献是无与伦比的,关于不同条件下PH对于色谱行为以及色谱柱的影响,以及色谱柱的评价都有很深的研究。

不知道你是何意,本人非研究色谱柱的,只是针对药典的色谱柱发表一些个人观点,无他
至于该工程师是不是贡献很大,我不做讨论
2010-10-26 18:32
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111 编辑于 2010-10-26 21:34
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