【求助】让师姐也挠头的提不出蛋白的问题

各位前辈高手请指点：

前天，中午11点30杀的大鼠，取脑，人工脑脊液浸泡，4度冰箱保存，下午4点拿普利莱公司的蛋白裂解液做的蛋白提取，以水为对照，电脑测定蛋白含量为— 5.67。（同期，师姐拿新鲜的脑提组织得结果为41。）

考虑是当时冰上裂解时间不够，今天又做了一次，结果基本相同：— 4.65。

问题分析：
1、脑组织不新鲜？？——师姐说虽然组织死掉了，但里面怎么样也该有蛋白呀。
2、保存问题？？——4度条件下，蛋白分解了？？
3、裂解液问题？？——师姐和我几乎同时做的，用的同一瓶裂解液（可提包浆蛋白、核蛋白、膜蛋白），她提出的蛋白测得含量为41。
4、蛋白酶抑制剂问题？？——第一次用的蛋白酶抑制剂确实是有点问题，应该拿异丙醇溶，我用水溶的。我也发现了这一问题，第二次换了另一公司的，经查询确实也是用异丙醇溶，买新的异丙醇溶的。而且根据我查到的资料，蛋白酶抑制剂应该影响不大，很多时候不用都可以提出来。试剂公司的也证实，很多公司生产的蛋白酶抑制剂纯度都不好，加上意义并不大。
5、匀浆问题？？——冰上操作的，时间是匀10分钟，冰上置20分钟裂解。（第一次匀完就离心了，师姐就是那样做的，并没有花时间冰上裂解，一样提出来了）
6、离心问题？？——4度，12000转，5分钟，取上清。

什么问题？？——想破脑袋了。

本贴的楼主学习非常认真，并且对每位帮助的战友都进行了反馈，使大家能够清楚的知道其实验的进展以及战友们的帮助的作用，从中能够学到不少东西，特加分并暂时置顶1周表示鼓励和对楼主的认真态度的感谢！

并提倡大家都学习这位楼主的态度，对别人的帮助进行一些信息的反馈，谢谢合作！