【交流】免疫组化没结果，大家来帮忙分析哈
发布于 2006-12-21 · 浏览 2002 · IP 重庆重庆
这个帖子发布于 18 年零 154 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
小弟做了一次免疫组化，没有结果（看不到传说中的棕黄色）。步骤如下：
1. 4℃保存的切片60℃烘干30min。
2. 脱腊、水化：二甲苯 2×10min，梯度复水，4℃，5min/级。
3. PBS 5min×2
4. 3％ H2O2（80％甲醇配制）静置孵育10min，RT。
5. PBS 5min×2
6. 0.001M EDTA中，92－98℃煮15min后自然冷却30min。
7. PBS 5min×2
8. 3％脱脂奶粉封闭1.5h，RT。
9. 滤纸吸干多余液体，滴加一抗于玻片上，孵育1.5h，RT。（为摸索一抗最佳浓度，设梯度：1：500；1：1000；1：2000。注：一抗是免疫兔子后获得的抗血清，临用时用1×PBS稀释。问题：抗血清需要纯化吗？）
10. PBS 5min×3
11. 滴加二抗（做Western的二抗，1：2000稀释），孵育1.5h，RT。
12. PBS 5min×3
13. DAB显色，不断镜检，30min后仍看不到棕黄色，认为没结果。
各位大侠，这个步骤有没有什么不妥的地方？就快年终汇报了，IHC还没结果，各位帮分析分析吧，
1. 4℃保存的切片60℃烘干30min。
2. 脱腊、水化：二甲苯 2×10min，梯度复水，4℃，5min/级。
3. PBS 5min×2
4. 3％ H2O2（80％甲醇配制）静置孵育10min，RT。
5. PBS 5min×2
6. 0.001M EDTA中，92－98℃煮15min后自然冷却30min。
7. PBS 5min×2
8. 3％脱脂奶粉封闭1.5h，RT。
9. 滤纸吸干多余液体，滴加一抗于玻片上，孵育1.5h，RT。（为摸索一抗最佳浓度，设梯度：1：500；1：1000；1：2000。注：一抗是免疫兔子后获得的抗血清，临用时用1×PBS稀释。问题：抗血清需要纯化吗？）
10. PBS 5min×3
11. 滴加二抗（做Western的二抗，1：2000稀释），孵育1.5h，RT。
12. PBS 5min×3
13. DAB显色，不断镜检，30min后仍看不到棕黄色，认为没结果。
各位大侠，这个步骤有没有什么不妥的地方？就快年终汇报了，IHC还没结果，各位帮分析分析吧，
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2002
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