【求助】我的免疫组化不出结果，敬请帮助

我的一抗 Antibody to NRP-1,经过三次试验未出阳性结果，我把三次的免疫组化实验方法简要介绍如下：
（我的标本是来自人胃癌、结肠癌的石蜡标本，中杉公司的SP试剂盒，博士德的DAB）
第一次：取同一例标本的十张切片，按1:100;1:150;1:200;1:250;1:300五个浓度摸一抗浓度，抗原修复使用高压修复（喷气后时间1分30秒），结果全阴性。
第二次：取另一例标本的十张切片，按1:25;1:50;1:75三个浓度，做法同第一次，结果仍阴性。
第三次：取与第一次相同的标本，按1:50的浓度做，抗原修复部分采用高压加酶双修复（高压时间同上，酶使用灏洋公司的“复合消化液（T/P/E）PH:6.0即用型”时间37度25分钟），部分仅用酶修复，时间同上；还做了一张不用任何修复的，并且同时做了第八因子相关抗原F-Ⅷ(组织切片和做NRP-1相同，高压修复1分30秒)，结果第八因子相关抗原F-Ⅷ阳性结果，显示我的其它试剂没有问题，而nrp-1却仍然阴性。
敬请各位老师、战友帮助，万分感激！