【求助】冰冻切片免疫组化

各位老师好：
我想测心肌HSP70的含量，由于条件所限，必须用冰冻切片免疫组化法做，虽然看了论坛上许多帖子，但是 众说纷纭，因而还有许多疑问，希望各位老师帮助解答，谢谢！
1 在取心脏之前是否要进行4%多聚甲醛灌流？（因为我看到许多帖子说做脑组织的 冰冻切片要对心脏进行灌流的，而心脏则没有看到有这种说法）
2 方法一（若不灌流）新鲜组织取出后，直接放入液氮中速冻，速冻时是用锡纸将组织包好悬在液氮罐中还是直接投入液氮里面？时间多少？然后放在-80冰箱里面保存待做冰冻切片可以吗？
方法二（若不灌流）新鲜组织取出后，放在4% 多聚甲醛固定过夜，然后 15% 20% 30%蔗糖过夜后就可以做冰冻切片吧？
3 接上面，如果不能立即作冰冻切片，组织应如何保存，是不是一直要放在4% 多聚甲醛中？
4 切片后，是否要4%多聚甲醛后固定？如果不立即做免疫染色，室温晾干保存-80冰箱就可以了吗？