【求助】蛋白纯化后电泳出现两条带

请各位高手指教，我用chelating Sepharose Fast Flow 纯化的蛋白，蛋白分子量是40KD左右，后来跑的电泳图谱是两条带，一条在40KD左右，另一条在45KD左右，两条带的量基本相同，
不知道问题出在哪里，老板说是我没洗干净，用的含尿素的洗脱缓冲液（包涵体表达）要优化一下，跟pH值或者咪唑有关系，但他不计得是哪一个了，让我查，但是我现在没查到，纯化胶的说明书没有了，问别人，他们说没遇到过，不知道。
请指教，不胜感激！