【求助】大鼠乳鼠心肌细胞培养的困惑!!
各位做心肌细胞培养的朋友,晚上好!我最近做了两次的心肌细胞培养,第一次使用的是小鼠,第二次使用的是大鼠,但是两次的结果都不是很好。第一次在培养后24小时换液,等再次换上没有加入BrdU的培养液后,细胞仍然有很多增殖,感觉在细胞中有很多成纤维细胞;第二次使用了大鼠(我打算以后使用大鼠实验),方法是一样的,但是最后得到的细胞很少,倒是没有出现细胞的继续增殖。在两次细胞培养中都有心肌的跳动,但是跳动的很少,只有5%左右。做过这方面实验的朋友给些指导意见吧,谢谢!我使用0.04%的II型胶元酶和0.06%的胰酶,每次消化约6分钟。共消化了5次后,剩余的组织很少,离心后沉淀重悬后过滤差速贴壁1.5h。我的感觉是消化过度,但是有师姐也是使用同样的方法,他说最后可以得到约90%的细胞跳动,让我很郁闷。恳请高手们指点一二,帮我走出这个迷惑。谢谢!!!