为什么我的CIA模型没成功?
近来做胶原诱导的关节炎(CIA)模型时不太顺利,模型不仅出来的比较晚(32+天),关节炎也不剧烈(≤6分/只),几乎看遍了园子里所有关于CIA造模的问题,虽学到了很多,但还是有些疑问。
1、动物选择:灰色,DBA/1J小鼠(药康提供),6-8周,雄性,体重大多在18克-20克,动物到了3-5天适应环境后开始开始第一次免疫
2、胶原和佐剂:都是博雷德代理的Chondrex公司的。牛II型胶原,货号是20022,浓度2mg/ml。CFA,货号7009,浓度2mg/ml。IFA,货号7002。
3、胶原佐剂的乳化:我深知此步骤比较关键,我严格按照说明书做的,胶原与CFA或IFA等体积混合,匀浆仪最高速,运行2min停3-4min降温,冰上进行,避免变性。大概匀浆40-60min,乳化后的溶液呈膏状,滴在水上乳滴不扩散(从水的反光面仔细观察时,在刚加乳剂到水上时会有一小圈油膜快速扩散,再乳化更久的乳剂也有这种现象,就没管)。
4、注射:选择尾根靠下2厘米处,皮内注射,100ul,打完小鼠尾根部肿胀变白。过1-2周小鼠尾巴很多出现溃烂、肿胀和有侧支血管扩张。第21天,在打第二针加强针时,困难加倍。在距离尾根部3-5cm出进针,避开溃烂部位,很容易出现:1)尾部皮内压力过大而爆浆,胶原乳剂损失;2)胶原误入血管,小鼠死亡。
5、记录关节情况:看protocol都说第21天再次免疫之后4-5天就陆续有发病的小鼠,到初次免疫38天左右到达高峰,一般到45天就可以达到100%,可我造的模型第30多天才开始一两个脚趾肿胀发红,45天时平均才4分,最高不超过6分。
想请各位科研大神支招,我的CIA模型失败在哪个步骤?有没有避免小鼠尾巴溃烂有没有方法?















































