【求助】转座子插入饱和度相关问题

各位前辈大家好！我是一名在读硕士生，目前正在构建副溶血弧菌的转座子随机插入突变文库。采用DAP缺陷型大肠杆菌beta 2163和副溶血弧菌进行双亲接合，接合温度控制在28度，时间16小时。目前已经构建5个文库了，但总的插入位点不足50%。想请问这个接合的过程是否存在问题？为何会出现有些位点插入频率很高，有些位点没有插入的问题呢？