石蜡切片HE染色全流程详解
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石蜡切片HE染色全流程详解
HE染色，即苏木精-伊红染色法，是病理切片中的常规染色方法。其原理在于组织或细胞的不同成分对苏木精色素的亲和力不同，经染色后细胞核及钙盐粘液等呈现蓝色，而胞浆及其他成分则呈现深浅不同的红色。
步骤如下：
固定：离体后的组织应及时进行固定，常用固定液有中性福尔马林、4％多聚甲醛等。固定液与组织体积比最好为10：1，固定时长一般为24-48小时。
脱水：利用梯度酒精对固定完全的组织进行脱水，为包埋剂的浸入做准备。具体操作包括75%酒精溶液30分钟--85%酒精溶液60分钟--95%酒精60分钟--100%酒精I 60分钟--100%酒精II 60分钟。
透明：二甲苯置换酒精，为包埋剂的浸入做第二步处理。具体操作包括二甲苯I 30分钟--二甲苯II 30分钟。
浸蜡：石蜡I 60分钟--石蜡II 60分钟--石蜡III 60分钟。
包埋：将组织固定于包埋剂中，便于切片。目前大多有模具，可根据实验所需进行正确包埋。
切片：使用切片机对埋块切片，一般厚度为3-4um。切片前，可提前将埋块放入冰水中浸泡，避免组织切片出现裂痕。
染色：
脱蜡：二甲苯I 15分钟--二甲苯II 15分钟--100％酒精I 5分钟--100％酒精II 5分钟--95%酒精5分钟--75%酒精5分钟----纯水。
染色：苏木素4分钟--自来水冲洗--分化液分化3秒--自来水冲洗--返蓝液显蓝1分钟--自来水充分冲洗5~10分钟--伊红25秒~1分钟。
脱水透明：80％乙醇40秒--95％乙醇1分钟--无水乙醇I 5分钟--无水乙醇II 5分钟--二甲苯I 5分钟--二甲苯II 10分钟--二甲苯III 10分钟。
封片：中性树脂封片，待其自然晾干后即可置于显微镜下观察拍照。
注意：片子不可在空气中长时间暴露，会有水分进入，因此从二甲苯取出后应迅速封片，不然将影响后续观察拍照。
