复乳法PLGA纳米粒求助

综合了一些文献我的步骤如下

1. 内水相0.1mL（5mg/mLBSA），油相DCM1mL（10mg/mLPLGA），水相直接加入油相，400w超声（工作5s，间隔5s，共10次）制备初乳

2. 初乳直接加入9mL 2%PVA水溶液，400w超声（工作3s，间隔3s，共15次）

3. 复乳直接加入15mL 2%PVA水溶液，圆底烧瓶磁子搅拌1h，旋蒸除DCM

问题：

第2步制备复乳时，用10mLep管，探头超声不能完全混匀，底部会有大颗粒油滴状，不知道是超声过度了还是超声不够？用西林瓶超声也是只能乳化一半的样子（上层透明，下层乳液），超声无法完全混匀油水相。

这样制备的粒子粒径达到620nm，跟文献里100-200nm相差很大，已经改了很多次油水相比例和浓度，不知道是为什么？还应该从哪里改进呢？

做了一个月了，快崩溃了😫求求各位大神帮忙看看哪里有问题或者哪里需要注意