求助呼吸道合胞病毒RSV-A2培养细节

我最近在用HEP-2细胞培养RSV-A2毒株，第一次复苏，接毒后4-5天合胞体和CPE都很明显，收毒P1代（加了终浓度20%蔗糖溶液作为冷冻保护剂），然后用P1代毒冻存后的接着传代，第二批合胞体和CPE都不明显，但收毒后CT值还能有20+，但是再用这批毒传代，就没有合胞体和CPE了，且接毒后细胞出现变圆，大面积脱落非典型的CPE，CT值也变成了30+，传到4-5代几乎检测不出CT值了......想请教下培养RSV还需要注意哪些细节？才能保证每代病毒的合胞体CEP稳定出现？

我的收毒方式：离心后取上清先放置在冰上等待，细胞沉淀用液氮迅速冻融一次，上清重悬冻融过的细胞沉淀，再次离心取上清，加入终浓度20%的蔗糖溶液与病毒液混匀，分装保存于-80℃。