WB实验一抗、二抗如何选择？

💡一句话总结：一抗是“精准导航”，二抗是“信号放大器”，两者配合才能点亮目标蛋白！

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🔍协作流程

1️⃣ 一抗上场：结合膜上的目标蛋白（特异性结合，如钥匙开锁）

2️⃣ 二抗接力：结合一抗的Fc段（自带HRP/荧光标记，信号放大）

3️⃣ 检测信号：化学发光或荧光成像，捕获目标条带！

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🎯一抗的作用

✅ 精准识别：像GPS一样锁定目标蛋白

✅ 实验核心：决定结果的准确性和特异性！

🚀二抗的作用

✅ 信号放大：一个一抗可结合多个二抗，增强信号

✅ 可视化桥梁：通过标记（如HRP）将“不可见”变“可见”

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⚠️常见问题+解决方案

1️⃣ 无信号：

一抗失效 → 换抗体！

二抗不匹配 → 检查种属是否对应

曝光时间短 → 延长或提高抗体浓度

2️⃣ 高背景：

封闭不充分 → 换BSA或脱脂牛奶，延长封闭时间

二抗浓度过高 → 稀释！建议1:5000~1:10000

3️⃣ 非特异条带：

一抗交叉反应 → 选择高特异性抗体

膜未洗净 → 增加TBST洗涤次数（3×10分钟）