求助：原核表达纯化caspase-3的质粒选择与实验方法
发布于 02-14 · 浏览 3706 · IP 北京北京
目的：原核表达并纯化有活性的caspase-3进行体外切割试验
方法：目前有三个种表达质粒（1）pRSET质粒，在T7启动子后插入caspase-3全长序列——M1-H277-SNSPGGHHHHHH （casp3）（2）pRSET质粒，在T7启动子后插入caspase-3活性序列（简称casp3-act）——MLERSS29-H277-SNSPGGHHHHHH （3）pET-28a质粒，在T7启动子后插入caspase-3活性序列MS29-H227NSSSVDKLAAALEHHHHHH
三者的表达菌株都是BL21(DE3)，条件均为到达对数期后0.2mM IPTG 30℃诱导6h
问题：考染之后看不到空载体和转入表达载体的菌株之间的区别
请教各位大佬，用哪个质粒比较好，诱导条件要怎么优化？
最后编辑于 02-14 · 浏览 3706
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