同源重组基因敲除中如何进行目的基因的扩增

已设计出上游同源臂引物和下游同源臂引物，扩增时需要分段扩吗，如果直接将四种引物混合在一起，直接扩增，这种思路会不会有问题，垦请各位大佬指教。