PCR出现比目的条带小的非特异性条带什么原因

求助各位大佬们，做的是普通pcr 左边是内参，右边目的基因，目的基因应该是上边那一条在321bp的位置，而且最后两个孔的条带没出来但是底下多出来了一条，想问下是什么原因呢，有什么改进办法吗，扩增条件分别是95摄氏度 30s， 54摄氏度 30s ,72摄氏度 1min，34个循环，谢谢各位大佬🙏🙏

第一列都是marker 从上到下分别是500bp 400 300 250 200 150 100 50bp ，右边六个孔是不同缺氧时间的心肌细胞