荧光定量pcr 反转录产物cDNA浓度需要保持一致吗

求助各位大佬

反转录前加入RNA的量一样 我看有的说RNA一致理论反转录出来的cDNA也一样 但是我的测的cDNA浓度还是有点差别的，那需要我再把浓度定量成一样的再做实时荧光pcr吗？

还有个问题想请教大佬怎么加pcr板的，我做出来ct值重复孔有时候差距的很大，我是先混匀再加的孔，我有的加到板底了，是加到壁上会好一些吗，三个重复孔我是每加一个换一个枪头，加完之后封膜甩板了。

请大佬指点下 谢谢啦！