WB实验高背景的原因分析

1.样品质量方面：注意提取蛋白的全过程低温，加上裂解液等；

2.不可一直加大上样量，应该在提取蛋白的过程中增加细胞或组织的用量；

3.封闭的时候提高牛奶或血清的浓度，延长时间；

4.洗膜的次数和时间可以增加；

5.抗体浓度高的话，可以降低抗体浓度；抗体质量不好的话，要么直接无条带，要么产生过多杂带造成高背景，此时就需要考虑换抗体；

6.适当增加吐温20的用量；

7.显影后倘若发现背景较深，可再次进行封闭然后重新孵育抗体；

8.背景较深时，将条带放在TBST中放在4℃冰箱过夜，浸泡一晚甚至更长时间后再去显影，可以有效降低背景。