WB用错二抗了还有条带

求助各位，我的膜需要先后孵线粒体内参和胞质内参，在敷完线粒体内参后，洗脱再孵胞质内参。今天孵胞质内参时（鼠），错用了兔二抗，结果膜上出现了条带，位置和线粒体内参很接近，请问是为什么呢？

还有请问非特异性结合是什么意思，是二抗直接和膜上的抗原结合还是跟一抗结合呢