24h新生大鼠原代神经元提取得率低

1、新生鼠断头取脑剥离血管膜，取部分顶叶皮质

2、pbs洗后，剪碎皮质加入胰酶消化15min，每5min上下颠倒一次

3、消化后加10％FBS的F12终止消化，吹打后静置收取上清，滤网过滤收集的液体离心1000rpm，5min

4、弃上清，吹打沉淀，计数种板，神经元六孔板每孔80-100万细胞。

问题:

1、细胞得率很低，一般这些组织最后只能种3-4个孔，想问问得率低是什么原因

2、消化后絮状物，终止消化吹打后絮状物漂浮在上层，不沉底，这正常吗？

3、最后收集上清离心后，沉淀较少，上清中有漂浮在中间的絮状物，怀疑是细胞粘一起，没有离下来？想问下这种怎么解决？😭