动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块油红O染色
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做动粥的小伙伴很多都会做到小鼠主动脉斑块的油红染色，通过斑块大小评价治疗方式的有效性。油红 O 为脂溶性偶氮染料，是很强的脂溶剂，能特异性地使组织及细胞内的甘油三脂、中性脂 质及脂蛋白显示深红色。但这个实验让很多小伙伴面临着主动脉取材不完整、着色效果不好、斑块与管壁对比度不明显、血管展不平等问题。下面分享一下我的个人经验。
首先是取材，这也是最关键的一个环节，最终染色的形态好看与否全看这一步！小鼠过量麻醉处死后（注意是否要取血分血清，如需取血还是要按正常剂量麻醉），将小鼠四肢固定，先做心脏灌流，将体内残余血量冲干净。从腹部做一U型切口剪开直至胸腔，剪掉腹腔内的消化道、肝脏、脾脏、胰腺等组织，注意先不要剪掉肾脏防止不小心将腹主动脉从肾动脉处剪断。横断左右肋骨，暴露心脏和肺脏，新手建议也先不要剪掉肺脏。
用镊子撕掉胸腺，首先先看到主动脉弓。这个时候就需要将小鼠放在体式镜下了，个人习惯倍数调到10倍到15倍之间。慢慢游离头臂干、左颈总、左锁骨下动脉，如图所示
此时，可以将心脏沿虚线剪下来，PFA固定后续左主动脉根部染色。继续向下游离主动脉，尽可能将血管外壁脂肪清理干净，这里需要提醒一下，一定要在体式镜下操作，看不清楚的地方不要下剪刀，血管和脂肪很好辨认，确认好了再剪。将整根血管游离至髂总动脉。然后按下面图式纵向劈开血管，需要用到维纳斯剪刀：
整根血管在体纵向劈开后，就可以放在染液中染色了，饱和油红O染液，常温染15～20min就可以。然后拿出来75%酒精分化，边分化边剔除外壁残留的然后的脂肪，最后铺平在载玻片上，用两片玻片对齐压平血管，固定24h后即可拍照或扫描。最终的染色效果如下：
参考文献：Imaging and Analysis of Oil Red O-Stained Whole Aorta Lesions
in an Aneurysm Hyperlipidemia Mouse Model（DOI: 10.3791/61277）
最后编辑于 2024-11-21 · 浏览 4467
