LPS诱导细胞炎症模型

实验背景

脂多糖(英文简写LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁外壁的组成成分，是由脂质和多糖构成的物质(糖脂质)。脂多糖由三部分组成:类脂A、核心多糖、O-抗原。LPS中的类脂A部分作为脂质双分子层外层的组成部分进入到脂质层中，糖链部分暴露在细胞外面，然后以这种形式存在于革兰氏阴性细菌的细胞表面。在LPS的生理活性表现中被认为起到最重要作用的是类脂A部分，类脂A可以单独体现其生理作用 。LPS很难从细胞壁脱落，当细菌死亡等时它会通过溶解、破坏细胞来脱落，并通过作用于动物细胞等而发挥其毒性。由于这种性质，它不是细菌分泌到体外的毒素(外毒素)，而是不被分泌的"存在于细菌体内的毒素"，所以又被称为内毒素。

内毒素模型是将纯化的LPS直接注射人动物体内构建的，由于其致病因素单一、能够排除其他影响因素，而成为研究细菌感染单一成分在感染引起的炎症反应中的发病机制的理想模型1。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁最外层的一层较厚(8~10nm)的类脂多糖物质，因其在免疫调节方面的特性而成为医学研究的兴趣点。

2. 实验材料

① 实验细胞：RWPE-1细胞。

② 器械：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜、台式低速离心机

③ 试剂：0.25% 胰蛋白酶、双抗、胎牛血清、PBS、RWPE-1细胞专用培养基、

3. 实验操作

① 取LPS粉末溶于无菌水使其母液浓度为5mg/ml，0.22um过滤器过滤；

② 用细胞专用培养基稀释LPS母液；

③ 细胞铺板24h后，弃上清加入配制好的LPS溶液；

④ 37℃ 5%CO2培养箱继续孵育24h；

⑤ 检测相应炎症指标。

4. 评价方法

① ELISA检测细胞炎症因子表达(IL-1、IL-6、IL-18、TNF-α等)；

② 试剂盒检测ROS、LDH、SOD、MDA等；

③ 流式/免疫荧光检测ROS、JC-1等；

④ PCR/WB检测炎症因子基因和蛋白水平的表达等。

如图所示结果！

5. 经验总结

① LPS可溶于DMSO，也可溶于水，为了减少溶剂对细胞的影响，可选择水去溶解LPS，最大溶解度为5mg/ml；

② LPS诱导细胞炎症反应，一定浓度诱导细胞不一定会出现细胞死亡的情况，因此不宜选用CCK8法去选择LPS造模浓度，可选择检测多个炎症因子去筛选浓度；

③ 不同厂家品牌的LPS货号不同引起的炎症反应不一定相同，还需客户自己选择。

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