液相方法学验证

求助各位老师，关于高效液相色谱子检测生物样品，我有几个问题想问一下

1、标准曲线一系列浓度点都是成比例增加或稀释的，但是总要从一个浓度开始操作吧，那怎么选这个对照品浓度去做标准曲线呢，每个文献都不一样，有什么依据吗？

2、是要随便进一个对照品浓度和进样量，然后去看信噪比>10找一个差不多的浓度把这个当做定量限，再选大于这浓度3-5倍的浓度当做标准曲线最低点吗？

3、那又怎么确保自己设置的标准曲线是可以把血浆样品待测物浓度范围包含住呢？我看有的论坛说是先估算自己样品浓度，但是这个不就是做实验要出来的结果吗，怎么自己提前预估呢？

4、在方法学验证第一步专属性时，就要加入相对应的对照品和内标，那这时候怎么确定加入对照品个内标的量和浓度呢？有什么依据吗？

是不是一开始就要定下来标准曲线浓度和内标浓度然后再做专属性？

5、我试着随便选浓度和剂量，进了一个只有对照品（1mg／ml）和内标（0.1mg/ml）的混合样品，但是都杂糅在一起了，而且血浆杂峰也是在前面几分钟出，这是不是意味着我的对照品和内标都不适合这个实验了？