椎间盘退变动物实验NF-kB P65测定的问题

小白跪求建议，各位大佬有任何想法或建议回复都非常感谢

1.想探讨椎间盘退变过程中NF-kB 通路激活情况，WB检测P65和P-P65一定要用细胞吗？如何提取髓核细胞？还是可以用髓核组织进行WB？

2.WB是不是应该用同一份样，先用磷酸化抗体检测p-p65,然后洗脱抗体之后，再检测p65？