一种简单的亲和纯化方法

在普通的分离中一般都用层析柱分离，但是需要柱子和设备，这就限制了亲和介质的应用，这里介绍一种方法可以不需要层析设备就可以做分离纯化：
依据重组蛋白的表达量算出要用的金属螯合琼脂糖凝胶的量，金属螯合琼脂糖凝胶的载量为10mg/ml左右，样品先过滤，然后把一定量的介质直接投到样品中，在摇床上震荡5-12小时，保证要让介质悬浮起来，这样吸附更充分，而后抽滤，再用5倍介质体积的缓冲液含0.5M的NaCl在抽滤器上分三清洗，随后用3倍缓冲液含50mM咪唑分两次清洗，最后用3倍缓冲液含50mM咪唑分两次清洗，把收集的清洗部分跑电泳鉴定，这样不需要柱子也就可以分离带his标签的重组蛋白，快捷而且方便，没有柱子的情况下不妨一试，这个方法也适用于别的层析介质，只是洗脱方法不同而已。