谈谈Western blot实验的一些经验（抗体稀释问题）

本人在Western blot实验过程，曾经一直纠结一二抗的稀释液到底用什么，之前曾尝试过

①TBST稀释的5% BSA；

②直接TBST稀释一二抗；

③公司买的成品一二抗稀释液。

我目前在稳定使用的是公司买的成品一二抗稀释液，直接用来稀释一二抗。用久了发现，这个成本有些高，就是二抗稀释后的话，我之前一般最多只用2次，然后就不回收扔掉，但是这样感觉挺浪费稀释液的。所以后来我尝试将二抗回收利用4-5次，最终也能曝光出来，只不过回收次数越多，条带的背景越没那么“白”，有些发“黑”，但是目的蛋白要是好曝光的话，也不影响使用。最近，一个师妹告诉我说，她每次都直接用TBST稀释一二抗，不加别的东西，因为在网上有看到说一二抗最好用同一个稀释液，避免影响最终结果，所以我一直没尝试。这几天，我试了试师妹说的方法，只不过先用TBST稀释的二抗，一抗用的还是成品稀释液配的回收后的，最终曝光效果也可以，我打算之后二抗就用师妹说的，直接用TBST稀释，一抗继续用成品稀释液稀释。

用成品一二抗稀释液稀释的一抗的话，我目前最多回收利用了7次，感觉效果也还行，每次用完后回收放在-20℃冰箱，下次接着用。