WB条带异常
发布于 2024-04-12 · 浏览 521 · IP 广东广东
这个帖子发布于 1 年零 24 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近跑了一个鼠肝蛋白的WB，出现了好异常的条带
烦请uu们帮忙看一下可能是啥问题，感谢感谢。
用200ul RIPA+PMSF裂解鼠肝，插冰上裂解半小时，12000rpm离心15min取上清，BCA测浓度后调齐浓度为10ug/ul，加5×蛋白loading后100℃煮10min变性。
上样量每孔120ug，浓缩胶80V跑25min，分离胶120V跑70min。转膜条件为230mA 80min（所需蛋白条带的最大分子量为70kDa），然后TBST洗3次每次10min，用无蛋白快速封闭液封闭20min，再TBST洗3次每次10min，一抗（1:1000稀释）4℃孵18h。
次日TBST洗3次每次10min后孵二抗1h，再TBST洗3次每次10min。后曝光。
但是这个条带爆出来怪怪的（左边2个marker，4个一组×3次重复，右边1个marker），样本条带的第1、2、3条是同一次提的样本，第4条是另一次提的样本。结果样本条带的第1条感觉很正常，反而第2、3、4条不大正常。
请问有没有uu有过这种情况啊啊啊啊
最后编辑于 2024-04-12 · 浏览 521
2 收藏3
