扩目的基因，为啥扩不出目的基因，引物二聚体超级亮

目的基因（鼠源）：slc37a1、slc37a2、slc37a3、slc37a4

序列都是在ncbi上找的，然后设计引物

a1: 

F: GAATTCACATGGCTCTGCTTCCCGT 

R: CTCGAGTTAGTGTTCCTTCAGCGGA

a2: 

F: AAGCTTGATGCGGTCCTCCCTG

R: GGTACCTTAAATTTGTTTGTACCCAC

a3：

F: GGATCCTATGGCCTGGCCACGAT

R: GAATTCTTATTCATTAAGTGAGTGAGC

a4：

F: AAGCTTGATGGCAGCCCAAGGCTA

R: GGTACCTTACTCTCCCTTCTTGGA

提的小鼠肠的RNA，反转录为cDNA作为模板pcr,一直扩不出来，找不到原因，后来又重新设计了a1和a2 的引物

a1:

F: GAATTCACATGGCTCTGCTTCCCGTGGGCAT

R: CTCGAGTTAGTGTTCCTTCAGCGGAGCCTGGA

a2:

F: ATGCGGTCCTCCCTGGCTCCTG

R: TTAAATTTGTTTGTACCCACTGCTTCTGCCGC

然后再次pcr,还是只有A2出了一条微弱的带，再按那个条件pcr就扩不出来了

这张图是换引物之后的

这张图是用有a2微弱条带的条件再扩就没条带了

求大神看看是哪出了问题，搞了好久扩不出来天天郁闷