标准曲线/图片的重要性及其绘制（Graphpad和Excel教程）

检测分析的首要任务是对收集材料的定性和定量，定性可以确定样品包含待检物质的有和无问题，定量是对待测物质含量范围的一个标定过程，因为，在实践检测到过程中，某些试剂盒的检测都有上限，所以选择一个合适的浓度范围进行相关测量能够更好的反应实验数据的准确性。因此标准曲线（Standard curve）已然是分析检测中的常作准备工作之一。

1 首先根据标曲

首先根据试剂盒提供的标准品，进行加样。确定标准品的OD（optical density）值和浓度的关系，这样就获得了标准品的基本数据，后期可以根据标曲推测样品的浓度，进而保证每一个重复或者每一个加样的物质的总量都是一样的。

标1 根据标准品获得OD值与浓度之间的关系

2 excel制作标曲实践操作

2.1 绘制散点图

首先选中需要会绘制散点的数据，接着在excel菜单栏中选择“插入”，然后找到散点图，最后选择需要插入的具体散点图的样式，如图1所示。

（图1 excel绘制散点图具体操作）

2.2 散点图结果

执行2.1（或图1的操作）的操作命令后，即可获得散点图的结果，此时只是一个单纯的散点图结果。

（图2 散点图的绘制结果）

2.3 曲线的拟合

选中图2中的任意一个数据点，点击右键，然后点击“添加趋势线（R）” 即可；

（图3 完成数据点的趋势线添加）

2.4 标曲公式即R值的获得

完成2.3（或图3）的操作命令以后，在设置趋势线格式里边，选择“显示公式”和“显示R平方值”即可获得完成的标曲线。

（图4 获取公式和R平方值设置）

对于获得R平方值一定要和说明说进行比较，因为说明书会明确要求R²≥多少，才是有效的数据。

（图5 最终完整标曲的展示）

2.5 曲线及R值结果揭示

Y=1.0338x + 0.0152

（解释：y标识浓度，x表示OD值，0.0152表示y截距，R²表示相关性。当然，也可以根据标准的浓度/质量，对OD值进行一个物质浓度/质量的定性。）

2.6 举例说明

实验数据的运算（以OD=0.32为例）

Y=1.0338*0.32 + 0.0152

Y即为OD=0.32的物质浓度（浓度单位参考试剂盒的标品说明书），其余的直接可以在Excel中进行copy and paste（包含有公式）。

3 GraphPad标曲绘制

3.1 新建一个GraphPad文档

一般来说，是创建XY的图形，这种图形的获得可以放在后期的论文或者毕业论文里边，增减文中数据的有效性。

（图1 新建一个GraphPad XY文档）

3.2 录入数据

将获得的数据录入到GraphPAD数据框中，在这里OD或Density的位置没有具体要求，但是务必记住，X和Y分别表示的意义。

（图2 GraphPAD完成数据路数展示）

3.3 相关（correlation）获得标曲

首先使用GraphPad的分析“analyze”，然后就会自动弹出，分析的方式，我们在这里选择linear regression，进行回归分析。

（图3 GraphPad对数据进行相关分析）

通过3.3（或图3）的设置，即可自动跳到图4界面，进入图4界面以后，使用默认参数即可。

（图4 Linear regression参数设置界面）

（图5 linear regression分析结果）

3.4 获得图片

我们通过这些数据经过linear regression获得结果不仅有方程和R²的数值，还有对应的图片，图片经过美化以后即可放到论文中去。

（图6 获得数据对应的图片，当然也可以对该图片进行适当的调整，以便更好的放到论文中）

3.5 最终结果展示

Y=1.1150*X-0.01791

Y表示物质的浓度（或质量，根据自己带入数据可知；X表示对应物质的OD值；-0.01791表示Y轴截距。）

通过Excel和GraphPAD拟合的标曲，结果发现GraphPAD拟合的标曲最终的结果更靠近，毕竟GraphPAD是一款专业的统计软件。

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