生化|纠细节 标本稀释时，您有考虑先加标本还是先加稀释液

自动化发展到今天，检验科生化操作人员越来越依赖仪器，但是有一些手工操作是不能避免的，比如标题提到的标本稀释问题。就是这样貌似“简单”的问题，在日立公司做技术的这几年，发现类似的细节问题尤为重要，甚至会影响实验结果。比如，溶解干粉类校准品或质控品时，是否应从2-8℃冰箱取出后恢复至室温再溶解，选择哪种方式加去离子水最准？

针对题目，以及新提出来的问题，随机调查了多家医院，征得他们的同意后，总结如下：

1.标本稀释时，您有考虑先加标本还是先加稀释液吗？

A医院：没想过这个问题，随手拿到哪个就先加哪个。

B医院：一般个人习惯先加稀释液，再加标本。

C医院：一般先加标本，再加稀释液，因为那样就可以很好的把标本进行混匀。

2.您认为溶解干粉校准品或者质控品，从2-8℃冰箱取出之后需要恢复至室温再溶解吗？

A医院：为什么要恢复至室温，我们不这么做。

B医院：没想过这个问题，一般拿出来就溶解。

C医院：一般都是拿出来就溶解，没有做过强制规定。

3.溶解干粉类校准品时，您认为哪种方式加去离子水最准？

A医院：EPPENDORF（艾本德）移液器加样最准，我们医院只能用它，也很方便。

B医院：天平称量最准，但是我们这没这条件，所以使用移液器。

C医院：使用固定刻度的移液管，但也有人用移液器（加样枪），不做强制规定。

或许你已经有了自己的答案，又或许你觉得不重要。但既然问题已经提出，还请听听我的想法。

1.标本稀释时，先加标本还是先加稀释液呢？

稀释标本时，笔者本人之前遇到的细节问题，谈论较多的一个是：“稀释液应该一次加，还是分次加？”一般来说，一次加稀释液较为准确一些，因为分次加稀释液，可能会增加误差。另一个是：“加稀释液时，使用移液管还是一般的加样器（俗称”加样枪“）？”这与我们第三个问题较为类似，稍后讨论。

但到底是先加标本，还是先加稀释液，一直以来，我认为没什么区别。

有且只有两种结论：一是认为先加标本好，理由是加稀释液后就可以直接混匀了。反方观点认为，无论先加谁，都可以很好的混匀；二是认为先加稀释液好，理由是加稀释液后再加标本，使用加样枪时，标本可以在稀释液里边反复润洗几次，保证加样准确。反方观点认为，加样枪枪头一点点的剩余不会影响加样准确，是允许残留的，就跟移液器一样，没有写“吹”字，无需把最后一滴液体吹出。

我们的建议是先加稀释液，之后加标本。理由是：不同的标本粘附力是不同的，不同的加样TIP头对同一标本的吸附性可能会由于批次等因素不同。理由也许牵强，不一定完全正确，但无论哪种方式，您的实验室有严格要求哪种方式吗？若一人一种方式，随机性很强，您还认为无所谓吗？

2.溶解干粉校准品或者质控品，从2-8℃冰箱取出之后需要恢复至室温再溶解吗？

跟很多朋友一样，笔者本人从未思考过这个问题，但听过我们工厂实验室的解释后，却让我恍然大悟。他们认为应该恢复至室温之后在溶解，假如空气湿度较大，从冰箱取出校准品后马上开盖，可能会因为温差过大，瞬间产生的冷凝水造成结果误差。

3.溶解干粉类校准品时，哪种方式加去离子水最准？

答案是肯定的，使用称量法最准。不过有文献资料显示，采用定量移液管（精度0.01ml）时，与称量法最为接近。

采用分析天平称量法，目前来说，很多实验室并不具备，确实很难实现。那就剩下移液管和加样枪了。从目前笔者本人对实验室的了解来看，采用移液管还是加样枪，可能各占了一半。

其实并非要讨论谁更准确，因为相比而言，可能都很准确，只要严格按照要求，都可以获得满意的实验结果。

问题是：如何严格按照要求？有哪些要求？这是我们每个实验人员必须考虑并且熟知的问题，百度一下一定会有你需要的内容。试着回想一下，您的实验室是否出现过因为校准品溶解时，去离子水加入不准而导致的数据异常呢？