冰冻切片小鼠黑质TH免疫荧光染色不均匀问题

如图（这两张图来源于不同小鼠）黑质两侧的TH染色不一致，一侧TH染色细胞清晰，另一侧荧光较浅且比较模糊，依稀能看到一些TH阳性的细胞，

黑质两侧的TH染色不一致，一侧TH染色细胞清晰，另一侧荧光较浅且比较模糊，依稀能看到一些TH阳性的细胞，冰冻切片用的是贴片法，用组化笔画圈进行染色，30um厚。封闭破膜用的是5%BSA+0.3%TritonX100 室温1h, 一抗孵育过夜，二抗孵育2h。同一只小鼠不同的黑质层面会在同一侧出现这中染色较浅模糊的现象，TH染色异常的那一侧DAPI染色看是正常，与其他位置没有区别。尝试过冰冻切片抗原修复液，没有改善。感觉应该不是染色过程步骤的问题，因为一起染色的脑片，有些没问题，重复染有问题的脑片来源小鼠的其他脑片，依然有这个问题。请各位前辈指教，感激不尽！