求trizol法提取RNA浓度不足的解决方法

各位分子生物学以及生科的老师们好，我有一些关于rna提取的疑问，打扰了！平时提取的是血液科病人的骨髓及外周血，八月底刚开始做的时候都没有什么问题，提出来跑的曲线啊内参基因CT值啥的都挺好的，但是就十一过后这半个月每次提都提不出来或者浓度很低，我反复的实验了几次都没有发现有什么改变的地方，也很谨慎重复了实验确保步骤无误，但是没有改善。

另外目前实验室没有办法测定核酸浓度，平时我们只需要测基因和abl的比值就行，一般内参都在CT值23-26之间。想知道我还能从哪些方向梳理和调整呢？真的好焦虑😭

实验步骤如下：

1.200微升骨髓＋1000微升trizol充分混匀（使用振荡器）并室温静置15分钟

2.加入200微升三氯甲烷并充分混匀，混匀后室温静置10分钟。

3.4℃，12000r离心15分钟（以下离心转速和温度不变）。

4.取上清600微升 并加入600微升的异丙醇混匀，室温静置10分钟。

5.离心10分钟弃上清（直接倒掉和吸弃都试过了）。

6.加入1000微升无水乙醇洗涤，离心五分钟。

7.吸干后晾10-15分钟，观察沉淀颜色状态加入DEPC水溶解，加入量也根据沉淀量来。（但是不是水加的太多了，一般都只是够跑PCR就行。）

希望有经验的前辈和老师们可以给我一点建议谢谢！