高品质病理检测（十五）—Tunel染色

染色原理

• 细胞凋亡中染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。
• 由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。

染色步骤

1. 将 OCT 包埋的肿瘤组织做冰冻切片，厚度 4 μm。将载有组织玻片浸没在 4%中性多聚甲醛溶液中，室温孵育 30 min;
2. PBS 洗 涤 2 次(5 min/T)。用滤纸将样本周围的液体小心吸干。石蜡笔在样品周围描绘轮廓。处理好的样本放在湿盒中保持湿润(切勿让样品干燥);
3. 每个样本滴加 100 μL 的 Proteinase K 溶液(20 μg/mL)，室温孵育 10 min。去除 Proteinase K 溶液;
4. 滴加 100 μL 1 × Equilibration Buffer，室温孵育 30 min。吸水纸吸掉大部分的 EquilibrationBuffer，每个样品滴加50μL的TdT孵育缓冲液。置于湿盒中，37°C 避光孵育 60 min，PBS 洗涤 3 次，每次5 min;
5. DAPI 溶液染色 10 min，避光，PBS 洗涤 3 次，每次5 min；
6. 用抗荧光淬灭封片液，封片，置于正置显微镜 下观察并拍照。

案例展示