救救孩子，两个月了，T4连接还是连不上
丁香园临床病例数据库
证书编号：
dxy_coauwtl7
您的案例《救救孩子，两个月了，T4连接还是连不上》 经同行评议，被丁香园临床病例数据库收录。
收录时间 2025年5月21日
长按识别二维码
查看病例
查看病例
这个帖子发布于 2 年零 29 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
花匠是自己 推荐片段333bp，AflⅡ+BamHⅠ-HF双酶切PB回收后，浓度为16.6ng/ul，A260/A280=1.69，A260/A230=1.39
载体6366bp，AflⅡ+BamHⅠ-HF双酶切胶回收后，浓度为37.2ng/ul，A260/A280=1.84，A260/A230=1.05
T4连接体系(10ul,1:10)：
载体：0.3ul(6366bp,10ng) 37.2ng/ul
片段：0.3ul(333bp,5.2ng) 16.6ng/ul
T4酶：0.5ul
10*T4 Buffer：1ul
H2O:7.9ul
16℃ 过夜
已知片段的PCR产物没问题，测序正确，载体也没有问题，之前构其他质粒的时候成功连上了。比例我试过载体25ng1:3，也试过载体10ng1:7，还有载体10ng 1:10基本都是载体自连😭
提的质粒跑胶(载体10ng,1:10)
用AflⅡ+BamHⅠ-HF去切，没有切出333大小的片段，没有连接成功（载体10ng,1:10）
最后编辑于 2023-04-22 · 浏览 1138
