荧光特异性不强、背景高？注意这几点可以有效避免（有奖直播）
细胞成像实验过程中，经常出现各种让人头疼的问题：
荧光特异性不强、背景高
自发荧光干扰、细胞焦点模糊
活细胞一染色就死、信号追踪困难
荧光信号总是很弱、串色
......
如果你也有以上问题，3 月 30 日，丁香园将联合赛默飞为大家带来「舞动分子，美颜细胞——从流程到应用，轻松玩转荧光成像」主题直播，专家在线详细讲解荧光成像的攻略与应用，解决你的活细胞成像 & 免疫荧光实验困扰，并进行常见问题的排查与解析。报名直播并进入社群可领取荧光成像干货资料包，同时我们还准备惊喜抽奖环节：罗技无线蓝牙键盘、新秀丽书包、小米充电宝、随行咖啡杯等 100 份好礼免费送哦～
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细胞焦点模糊
回看实验数据，发现焦点从中途就模糊了，原因有以下几种：
1. 观察设备等会因温度变化而出现一定的膨胀现象，使焦点发生偏移
解决方法：放置细胞前用空容器暖机运行 30 分钟，暖机运行后放置细胞，在设定焦点等之前再等待 30 至 60 分钟；
2. 活细胞在拍摄过程中移动
解决方法：使用景深大的低倍镜或者有自动对焦功能或Z栈功能的高倍率镜头。
活细胞一染色就死
在成像期间或结束后查看细胞的情况时，经常会发现细胞从中途开始状态变差甚至死亡，原因可分为以下几种：
1. 光观察时激发光对细胞造成的损伤
解决方法：将激发光调弱并且在进行拍摄设定时避免照射激发光，不进行拍摄的时候将激发光切断。
2. 细胞培养及处理时环境不适宜
解决方法：提供合适（温度、二氧化碳浓度、湿度）的培养室及恒温箱；用水分不会蒸发的多孔培养板来培养细胞； 处理时避免空调等的风直接吹到样品。
3. 染料浓度过高
解决方法：实验前进行染色预实验，围绕染料说明书上建议的浓度，设置几个梯度，来确定能实现低背景、高信号、良好细胞状态的最佳染料浓度。
福利抢先看：
1. 免疫荧光实验干货资料：报名完成进入社群，即可获得赛默飞的免疫荧光干货资料包，其包括《免疫荧光实验流程指南》、《Alexa Fluor 荧光标记抗体合集》、《细胞成像分析实验方案》等。
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