新手养细胞-此贴会更新细胞培养相关资料

1.先查阅文献，确定自己课题用什么细胞---有钱有资源的找实验室或ATCC/国家细胞资源库等正经网站购买，没钱没人的找各种代理商买细胞--细胞到手之前，先倒背如流 细胞的培养方法（复苏/传代/换液/冻存），问厂家要说明书，了解收到细胞后如何处理——一定先买培养基！！！不然细胞到了没吃的，很尴尬——同时买好耗材（PBS溶液/胰酶）——详细可阅读附件 细胞培养手册。

新一株HUVEC

2 养这细胞2个月了，浏览些园子里帖子，结合自己遇到的问题，总结起来就是：

1、HUVEC是原代HUVEC还是细胞系？是不是真的HUVEC,有无杂细胞。

2、HUVEC细胞培养基是ECM还是DMEM。

3、细胞增殖速度提不起来。

4、随着细胞传代次数增加，细胞出现“拉丝”“伪足”改变，是否正常？

5、细胞支原体污染

下面总结了园子里有关的帖子，共学习参考，有经验的前辈们，能留言分享一下培养心得吗，想知道HUVEC细胞能用DMEM培养？

3.28

一 丁香园

1 已解决的

（1）楼主（小X的漫漫求学路）复苏P10 细胞，HUVEC出现形态改变，呈现“小木棍”，培养基是ECM，考虑细胞分化。培养基：DMEM F-12培养基+10%胎牛血清养

现在培养基：ECM

更换培养基方法：细胞状态好的时候——禁在刚复苏和传代开始——应该在第二天贴壁后，状态较好时候，可以将原培养基和要换的培养基1:1混合之后继续培养（也可以2:1或者3:1，目的是给细胞一个适应的过程），随时观察，直到细胞可以在新培养基里正常生长就可以后续传代了

原因：细胞本身问题，楼主已经更换细胞了

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/46435458?replyId=&page=1

（2）豪斯小粉楼主

 问题：养殖的HUVEC总是漂，密度也在长

原因：国内HUVEC细胞不纯，需要做STR细胞鉴定，很多做出来是T24（人膀胱癌移行细胞）

 （3）澳音AY楼主

   楼主更新HUVEC培养经验

（4）叶子cc 楼主

 PUMC-HUVEC-T1和HUVEC区别，学习PICK

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47764925?keywords=HUVEC

（5）吃矿石的小佶 楼主

可以明显看到细胞老化、空泡化，以及细胞污染背景黑。

原贴：请教大家两个细胞培养的问题

1. 我有一皿HUVEC没长起来（如下图），看到一些细胞中间像水泡一样，不知道是什么原因呢

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47132263?keywords=HUVEC

（6）芒芒小夏 楼主

针对复苏密度低，可以复苏稳定后，重新胰酶消化传代，加入2瓶细胞，调整细胞密度

原贴：求助！HUVEC人脐静脉内皮细胞成片脱落怎么办

培养条件：DMEM（低糖）+10%FBS+1%双抗

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47210255?replyId=47215441&page=1

（7）雪夜剑侠 楼主

楼主复苏后贴别细胞太少，120h,增长了，但细胞形态看着不行。

原贴：在12月嘛。7月冻存在-80冰箱的原代HUVEC（2代），正常来说半天就能贴壁大半。目前复苏48h了，细胞相比昨天贴壁还是多了一些，不过形态比较异常而且细胞内颗粒很多，好担心啊。继续这么长一长能用来实验吗？

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45843288?keywords=HUVEC

（8）一个飞翔的小鸟 楼主

楼主的HUVEC养的很好，

原贴：大家看一下，这是自己分的细胞，已传3代，这是第四代。这感觉是huvec吗，为啥会有梭形细胞？

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45753786?replyId=&page=1

（9）嗣童wise 楼主

原贴：我最近在进行HUVEC原代培养，每次感觉细胞很少，越往后长的特别慢，而且贴壁细胞群群中间的细胞好像老了，感觉好像营养跟不上了，细胞群周边的细胞长的还不错，就是长的太慢，我用的是20%血清1640培养液，加VEGF浓度为20ng/ml,有培养HUVEC的大家进来都讨论一下吧，互相交流一下，小弟现在研三了，来实验室快两个月，一直培养不出来，后续实验也没法开展，都愁死人了。

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/29010536?keywords=HUVEC

(10) Mr复苏 楼主

原贴：原代HUVEC提取求教：最近提了七八次原代HUVEC，用的胰酶或者胶原酶，也尝试明胶包被了，但是细胞就是不贴壁，希望有成功提取经验站友分享一下经验

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45787804?replyId=45788457&page=1

回答：1型胶原酶37摄氏度消化8分钟；终止后1000rpm，10min；用标准的细胞培养皿（已包被过的商品）培养12h一般就贴壁了

(11)此用户已注销 楼主

原贴：显微镜下人脐静脉内皮细胞HUVEC

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45224057?replyId=45414896&page=1

(11) 科研民工 楼主

第一次见这样的结晶，不过楼主发现是FBS的结晶

原贴：细胞培养液有晶体 有人知道是什么污染吗

最近培养huvec过程中加了EGM培养液以后出现晶体状物质，并且培养一天后增多，现在已确定培养液中有被污染，有人知道是什么原因或者污染吗？谢谢

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45217694?keywords=HUVEC

（12） 小叮当hxq 楼主

原贴：这款细胞种在培养瓶里长得慢，一管100万复苏到75T瓶里大概要7~10天才能长到80%融合度，而且2天一换液培养基里就有挺多漂浮细胞。

最要命的是种在六孔板里，不管怎么接种都是中间密周围疏的情况，我种别的细胞都不会这样，而且中间密集的区域一天要死好多细胞，长得还没死的多，有的孔养着养着就全漂了。感觉不像染菌的情况，我养别的细胞很久没出现过染菌了。

我用的培养基是H-DMEM+10%FBS+1%NEAA+1%PS，后来咨询技术客服，把血清浓度提高到15%了，还是一样的情况。有没有师兄师姐养过这款细胞，我都要疯了，前前后后捣鼓了一个多月，请大家不吝赐教，谢谢了！

(12) DHHMXSL 楼主

原贴：大家帮忙看看这是HUVEC吗？养别的细胞都挺好，这个买了一直养不起来。

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/44577783?keywords=HUVEC

(13)MyLifeQ5Y0楼主

原贴：永生化huvec细胞系的形态问题

如图，突然就变样子了���

性质似乎也变化了，之前都是传代后4-5天长起。前两天突然就变了样子，并且1/2传代第二天就满了���有大神知道这个细胞是咋了嘛。

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/44312783?keywords=HUVEC

(13) 萝卜豆豆楼主

原贴：本人科研小白，计划培养原代HUVEC,经费有限，用哪种级别的胎牛血清可以养起来啊

本人科研小白，计划培养原代HUVEC,经费有限，用哪种级别的胎牛血清可以养起来啊

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/44242589?keywords=HUVEC

（14）

原贴：请问园内大佬：关于细胞氧化应激建模中的 H2O2 的几个问题！

小弟打算做人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化应激模型，文献上H2O2的给药浓度都是几百μM，意味着所需H2O2的量极少。以下有几个困惑，请大佬们解答：

1.既然所需H2O2的量很少，为什么还要买30%H2O2呢？直接买3%H2O2，稀释倍数更少，还更准确些。是因为3%的不稳定或者不纯吗？

2.在发帖时间，本人确定sigma买不到H2O2了，国药对3%H2O2不备货，都买不到。30%H2O2还要单位去公安局网站备案（有资质的单位除外）。请问大家有没有合适的渠道，跪求。

3.如果用3%H2O2，医疗上消毒的能替代吗？浓度都一样

4.在帖子上看到很多H2O2建模困难的，有用叔丁基过氧化氢的老师吗，求赐教。急切地想知道答案，谢谢大家！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/44151071?keywords=HUVEC

2 未解决

（1）楼主：扎头士小甲

   HUVEC（P4）复苏前三天，细胞出现空泡，不知道是正常与否？（有图）

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47784679?keywords=HUVEC

（2）MyLifeQ5Y0楼主

  永生化HUVEC细胞系形态问题：楼主的传代细胞突然出现增殖速度加快，从4-5天变为2天，且形态改变（长不规则），也有空泡状态。 https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/44312783?replyId=&page=1

(3) Marshal1楼主

 细胞形态改变，形态像污染

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/48058662?replyId=&page=1

(4) 星星要加油 楼主

  细胞形态改变，也是长条形

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/48058328?replyId=&page=1

（10）啵啵爱豹豹 楼主

胰酶消化后，细胞长长的，不太像正常HUVEV的样子

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47813622?replyId=48089667&page=1

（11）是小张哈 楼主

 求助，我的内皮细胞（HUVEC）最近复苏后传一代背景就有脏的黑点点了，脏的看不见正常细胞，脏东西贴在培养瓶上，胰酶能消化下来，像煤渣渣一样，培养液不变色也不混浊，这是什么情况啊，培养液和胰酶用的都是全新的，已经复苏三株了都是同样的情况。

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47794376?replyId=&page=1

（6）滔滔哥来了 楼主

人脐带静脉内皮细胞HUVEC，用到的EGM-2(CC-3162)，就是EGM-2 BulletKit (CC-3156 & CC-4176) - 内皮细胞生长培养基，发现细胞长得特别慢，最近才发现，这个专属培养基血清只有2%，是否还需要添加血清，本人为新手小白，请各位大神指点。

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47777416?replyId=47778480&page=1

（12）努力往前爬的蚂蚁 楼主

图中显示：HUVEC形态 长长的

原贴：求教各位大神，HUVEC复苏后第二天发现培养皿周围一圈没细胞，细胞全在中间。10厘米的培养皿，摇匀后在显微镜下观察，周围细胞比中间更密集，放培养箱24小时后就这样了。第一张图是中间的细胞，下面三张图是培养皿边缘的细胞。还请各位大神指导，谢谢！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47841538?replyId=&page=1

（13）汤不好喝 楼主

原贴：前段时间一直养的HUVEC都挺好，然后新复的一株huvec，代数25，搁天换了一次液，看着状态不太好，有很多触角，拉丝，培基基买的是商品化的HUVEC培养基，两天才勉强长满，长满后一传代形态就变了，求教各位是什么原因，还有没有什么可以补救的措施，谢谢大家！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47717838?replyId=&page=1

（14）海盐焦糖拿铁 楼主

 细胞形态改变、有拉丝样、伪足样，细胞本身问题或是污染了。

  原贴：前天晚上复的一株huvec，代数不明，昨天换了一次液，培基是DMEM 高糖+10%fbs+1%双抗，今天看着状态不好，培基也有点脏不知道是不是污染，求教各位是什么原因，还有没有什么可以补救的措施，谢谢大家！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47635666?replyId=&page=1

（15）岚紫晴空 楼主

原贴：【求助】请问C166小鼠血管内皮细胞可以用来研究动脉粥样硬化吗，另还有HUVEC相关问题：现在就是不知道是用C166小鼠血管内皮细胞、所谓永生化的HUVEC、还是EA.hy926、PUMC-HUVEC-T1，有了解的可以帮忙解答一下吗，十分感谢。

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/47485927?keywords=HUVEC

（13）却很坚强 楼主

原贴：求帮忙看HUVEC是不是有些支原体感染的症状

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/46400154?replyId=&page=1

(14) 小僧一枚 楼主

原贴：求助！！！人脐静脉内皮细胞（HUVEC)的培养

医学生一枚，目前正在做人脐静脉内皮细胞相关实验，刚开始养细胞，使用细胞专用培养基细胞生长良好，最近用自己配的培养基细胞生长到第3天死亡(没有污染)

自己配的培养基成分:90%DMEM(GIBCO C11965500BT)+10%血清(sigma)+1%双抗。基础培养基是高糖。请问有谁养过HUVEC，你们都用什么培养基细胞可以正常生长。有经验的师兄师姐，老师，分享一下。谢谢！！谢谢

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/46317888?keywords=HUVEC

（15）dxy_t20bfbo9 楼主

原贴：科研小白求问大佬们：有没有用ox-LDL和HUVEC造动脉硬化模型的呀，求指教！

请问是在细胞铺满80%左右时再加入ox-LDL继续培养24h、48h吗？有没有通过ELISA方法检测炎性指标来判断模型是否造成功的呀，请问是如何提取样品的呢？？刚刚入手细胞培养，不太明白，坐等科研大佬们指点迷津，感谢！！！！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45425928?keywords=HUVEC

（16）佛系学酥 楼主

原贴：关于中药复方细胞给药的问题

请问是在细胞铺满80%左右时再加入ox-LDL继续培养24h、48h吗？有没有通过ELISA方法检测炎性指标来判断模型是否造成功的呀，请问是如何提取样品的呢？？刚刚入手细胞培养，不太明白，坐等科研大佬们指点迷津，感谢！！！！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45425928?keywords=HUVEC

(17) Maymaya 楼主

原贴：HUVEC氧化应激

我最近在做HUVEC氧化应激模型，通过RT-qPCR检测Nrf2、HO-1、NQO1的mRNA表达量，发现，随染毒浓度升高，mRNA表达量降低。但是检测氧化应激指标SOD活力、GPX活力确做不到理想的结果，做出的结果是随染毒浓度升高，活力均升高，与mRNA表达量结果相悖。用的试剂盒是南京建成SOD检测（A001-3）、GPX（A005），现在想不通是什么问题，向各位大佬寻求帮助！！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/44292017?keywords=HUVEC

3 知识科普

（1）细胞空泡化

原因：细胞老化、渗透压及PH值、胰酶消化、细胞代谢、细胞自噬、支原体/病毒感染

https://zhuanlan.zhihu.com/p/575936571

（2）HUVEC，OX-LDL造模

原贴：dxy_t20bfbo9 楼主

图片均为给药24h后，前4张为对照组4,10,40,20倍镜；中间3张为10倍镜ox-LDL浓度50,100,150ug/ml）；后三张为40倍镜ox-LDL浓度50,100,150ug/ml）。肉眼没有看到内皮细胞有啥变化呢？用ELISA检测炎性指标也没有变化，培养基用的ECM，完全培养基包括ECM、FBS、双抗、ECGS，比例为100:5:1:1，造模一直失败，求造动脉硬化模型大佬们指教！！谢谢！！

https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45435253?keywords=HUVEC