【经验分享】油酸，棕榈酸刺激剂如何配置？

本人主要摸索细胞造高脂模型，苦于不知油酸与棕榈酸刺激剂如何配置，查阅大量文献和本人实操后，将经验和详细步骤分享给大家~

细胞株：L02细胞株，AML12细胞株

主要试剂：

油酸：细胞培养级，购自sigma，线性分子式：CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH CAS号：112-80-1 分子量：282.46 规格：安瓿瓶装，1g 开封后按200ul/tube进行分装，store at -20℃，注意使用封口膜进行封口（油酸为不饱和脂肪酸，易氧化）

棕榈酸：粉状，别的实验室薅的。

BSA：（注意是fatty acid free，FAF，无游离脂肪酸的BSA结合油酸的效果更好），购自翌圣

油酸储备液配置实验步骤：

（1）    配置0.1M的NaOH溶液：准确量取8mg的NaOH，溶于2mL的1640完全培养基中。

（2）    配置100mM的OA中间液：称取0.2mmol的OA（油酸式量为282.46，常温下密度为0.89g/ml，0.2mmol的油酸即为56.5mg，换算成体积即量取63.5ul的油酸液体），滴加到（1）中配置的0.1M NaOH溶液中，70℃水浴条件下不断搅拌，大约10min，直至液体不分层，且溶液中无固体颗粒或浑浊。（此步骤为皂化反应）

（3）    配置10%BSA溶液：量取1.8g BSA（fatty acid free，FAF），加入到18mL 1640完全培养基中，放在70℃水浴锅中预热。

（4）    将（2）中得到的100mM OA中间液趁热加入到（3）中的10%BSA溶液中，放置在70℃水浴锅中不断搅拌，可见溶液变成黄色澄清状，即得10mM的 OA储备液，0.22um滤头过滤后，1mL / tube分装在1.5ml EP管中，-20℃冻存备用。

配置棕榈酸，步骤不变，按照相应的式量换算即可。

有任何问题，欢迎大家留言讨论！

2023.4.13 更新一篇文献分享，作者探索不同配比和浓度的OAPA混合物诱导肝细胞脂质变性，对我帮助非常大，在此分享给各位。

这是楼主用OAPA诱导AML12细胞油红染色的示意图，可以看出脂质积累非常明显。特别感谢无私赠予楼主此细胞系的战友！

2023.5.16 更新棕榈酸配置小tip：

棕榈酸（PA）比油酸（OA）要难溶很多：

PA皂化时，70水浴至少反应30min以上，试管内应该是浊液形态，不能有白色的肥皂样晶体析出，提前把BSA放在55度水浴，PA拿出时一定要泡在70度水中，迅速用枪头吸出PA，立刻打进BSA中，若无析出物，就是配置成功了