外泌体提取纯化试剂盒（细胞上清）

外泌体提取纯化试剂盒（细胞上清）UR52121

外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质 的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液 及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细 胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效 应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及 所参与的生物学通路目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整 的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、 硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发 的外泌体快速提取试剂盒，组分经过优化处理， 适用于细胞培养上清液中的外泌体提取，并搭配 纯化过滤装置，可快速高效地获得高纯度外泌体 颗粒，可用于电镜分析、NTA 粒径分析、核酸分 析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

自备材料

1、高速离心机（可达到 10000 g 离心力）， 涡旋振荡器； 2mL 离心转子；1.5 mL 离心管；

2、1×PBS 缓冲液（无菌）； 

产品组成

组分名称 规 格

Exosome Concentration Solution* 100 mL

Exosome Purification Filter* 20 Tubes *

RNase/DNase Free, Sterile

操作规程

一、样品预处理

1，取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后 于 25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置 于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；

2，样品初始用量：（单次提取时的样品量）

样品名称 最 低 量

细胞培养上清液 20 mL

3，离心去细胞碎片：将样品转移至离心管 中，于 4℃以 3000 g 离心 10 min，去除样品中 的细胞碎片；（注：若沉淀较多，可 3000g/10min 离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）

4，上清液转移：去除细胞碎片的离心上清 液转移到新的 50mL 离心管中； 

二、提取外泌体

1，上清液预处理：在去除杂质的离心上清 液中加入 Exosome Concentration Solution （ECS 试剂），具体的加入剂量如下：（其他剂量 请根据表中的试剂用量等比例换算） 样品名称 样品剂量 加入 ECS 剂量

细胞培养上清液 20 mL 5 mL

2，溶液混合：加入 ECS 试剂后将离心管盖 紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 4℃ 静置至少 2 h；（增加静置时间可提高外泌体得率， 但静置时间不可超过 24h）

3，沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管 于 4℃以 10000 g 离心 60 min，弃上清，沉淀 中富含外泌体颗粒；（注：尽可能吸净上清液）

4，外泌体重悬：取 1×PBS 均匀吹打离心沉 淀物（具体加入剂量如下表），待其溶解后，将 重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中；

细胞上清样品体积 加入 PBS 剂量

20 mL 0.2 mL

注：其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算

5，收获外泌体颗粒：将含有重悬液的 1.5 mL离心管于 4℃以 12000 g 离心 2 min，保留上清 液，该上清液中富含外泌体颗粒。（注：若沉淀 较多，可 12000 g /2min 离心多次至无明显沉 淀，每次取离心上清液）

三、纯化外泌体

1， 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品 转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上 室中，于 4℃以 3000 g 离心 10 min，离心后收 集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌 体颗粒；（注：EPF 柱不可重复使用）

2，外泌体的保存： 纯化后的外泌 体以 50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中， 以备后继实验使用。

四、储存条件 本品在室温可稳定保存 24 个月，使用前请充 分混匀。

五、注意 本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学 诊断及其他用途！