血的教训后-RAW264.7培养贴

【RAW264.7培养亲身经验】

本人之前养过raw细胞，但是长时间不养及换了科研环境，所以重新拾起raw细胞的培养。

raw264.7正常形态：小圆形(如下图)，当然有少的细胞为小梭形也可以使用。

1.RAW细胞培养基：DMEM+10％FBS+1％双抗。FBS需要56℃ 30min灭活。FBS用尽量好的。联系将一瓶独立的培养基专门用于细胞培养，避免对RAW细胞的刺激。

2.细胞换液:

RAW细胞生长依赖自身分泌的细胞因子，所以换液可以保留一点点培养基，本人留25％。当然，全换也没问题。

3.细胞传代:

相信这个是大家最为头疼的一步。本人尝试过多种处理方法。

个人认为最好的处理方法是用预冷后0.22滤膜过滤的PBS洗两遍，然后加入少量的全培。此时，可以用手拍一拍培养容器，部分细胞可掉落。此外，使用巴式吸管轻微吹打培养皿3-4遍。吹不掉的细胞就不要了，有些是贴壁比较劳的已分化细胞，有些是未分化状态好的细胞。当然raw细胞长的快，不用太多细胞进行培养是足够的。吹打后，如果细胞比较散可以直接铺板使用，聚团需离心后吹打悬浮铺板。

另外也有些注意的:

RAW细胞尽可能每天处理，这样的话细胞状态一般越来越好。

如果需要大量细胞及细胞需要培养的时间长，细胞规格度＞60％后续每日换液。

细胞在传代在细胞60-70％时一定进行，不然在细胞密度大时，很容易受刺激分化。

细胞出现分化初始状态就不要进行挽留了，浪费时间，复苏新的！

细胞枪头一定不要节省！！！能换则换！