包皮原代培养成纤维细胞



可以请假下你们,为啥我的原代培养细胞有这种黄色团块啊,把贴壁细胞都聚成团了,洗不掉,胰酶消化100g离心后传代后还是有,真的无语了,有些没这种黄色团块的地方就很分散,有团块的地方细胞就聚一起了,一开始做完就有这种团块,现在想问这是啥,有些黄色是透明,有些像是细胞团,里面黄色看得到是一颗颗的圆形细胞聚在一起,还有很多贴壁细胞黏在团块的下面,搞得贴壁细胞都在一起了,怎么去掉团块才能不影响我的后续实验,我做的是包皮原代培养成纤维细胞!
而且感觉长得很慢,都一周了还没长满,是不是团块的问题,有些地方密,有些地方稀疏,密的地方就是聚成一团,周围啥都没有









具体步骤是先碘伏和三抗pbs交替清洗,之前不用碘伏,之前只用双抗pbs一直出现污染问题,一做完就污染,现在不会了
然后去掉脂肪结蒂组织,手术刀刮表皮,表皮很难完全刮干净的,总是剩一些,脂肪也很难完全去除
然后手术剪剪碎,胰酶消化1h-1.5h,胰酶的量约是组织快的1.5-2倍,1ml血清终止,离心去上清,用培养基洗后再离心,再去上清,培养基重悬后100
um筛网过滤,过滤后再离心,去上清加培养基重悬后放入培养瓶中
培养基用的是10%胎牛血清的DMEM F12培养基,其他无特别,刚做完就有很多悬浮细胞还有一些这种团块,后面换液后团块还在,后消化了100g每min离心后,团块还在,黏在瓶壁,甚至黏着细胞,怎么去除啊,有大神知道问题出在哪儿吗??
最后编辑于 2022-11-07 · 浏览 2167