Wb经验帖‖电泳+内参调平配平（后台很多粉丝私信我这些，我就出一期，谢谢大家！）

看了看后台，确实很多人来咨询问题，我专门挑几个来讲讲！

一：电泳的时候，成一条线

这是很正常的，一般不会影响实验结果的准确性。除非你的量特别大，最后造成了条带显影也连一起。适当减少一点量。

二：如上图，那个蓝色的成了一条线了？

也不要慌，蓝色的出现和高度的大小不影响实验结果，不要过度的解读，是不是我这个厚了就蛋白海飘着啊，细了更好啊？

，我来解读一下，电泳的时候，你能看到有颜色的线条，就是染料，其中也是有蛋白的，因为蛋白样品就是蛋白和loading buffer的混合物，所以你能看到颜色啊，关于颜色的线条怎么样，其实一般不影响你的结果。

但是有同学就纠结这个，那么，我就说明白呗，一般而言，我们去看marker的分离判断电泳的好坏情况，marker分开的层次均匀，一条线，就是挺好的，再配上我的电流理论（前面page讲过），一般电泳不会有问题了。然后marker分开的时间可以判断你的浓缩胶的厚度，也可以初步判断你的胶的质量如何，因为电泳主要是看浓缩胶层，浓缩胶层越高，电泳时间越长，相应的条带也不会胖呼呼的，另则反之。我之前讲过最好的厚度是1公分左右。

你的蓝颜色带的粗细高低也是也是侧面反应了浓缩胶的高度问题。

三：胶不够齐怎么办？

其实我有讲过，用异丙醇压挺好的，大概就是预留的高度1cm（浓缩胶的高度），压个10mins，这无水乙醇，我看评论区的大佬说了，两边对调注无水乙醇，应该有效。

如果胶不齐，还是不要用了。

四：如图，分离胶下层有空缺，没有胶。

我之前配胶也出现这种情况，但是这种空缺都没关系，一般而言跑电泳，距离底部1cm左右就停了，也用不到那么点胶。

（据我观察，小分子的蛋白也不用那么下，如果缺了很多，还是重新配胶。）

五：内参配平问题和显影曝光度问题？

1：内参不用去配平，一般你会对蛋白定量，各孔洞的都是99% 的蛋白了，加的量一样，一般不用去配平。有人有疑问了，最后显影的也不是1:1啊，那我要不要配平啊？

看情况，比如说100：80，必然要，都大于操作失误外漏的了，必然要啊！

如果是10000:9920呢？肯定不需要啊，这不就是1：1吗？你为啥要精准到10000:10000呢？

所以一般差不多的精确1:1就行。

2：我显影调了背景，调了伽马，调了曝光度，会有影响吗？

亲，你显影调的是整个条带，不是单独的条带，你这个目的蛋白组，最后的结果是要x:y:z的结果，而不是看xyz的灰度分析值有多大，你调的是整个。

当然你不要对一组条带里面的某一个条带调节，你这是操控数据，这是ps，这是造假，不能用！！！！！！！拒绝造假！！！！

六：前两天有一个人问了一个问题，我回答了一下，但是后面的问题，我不知道怎么回答，我的理解他在操控数据，造假，这种行为不可取（不知道我对他理解的有没有错误）

另外奉劝各位，wb确实难，但也确实容易，奉劝各位保持初心，不要造假，做实验要维持本心，守住底线。

另外有问题，可以私聊我，或者留言！谢谢！