原核细菌基因敲入(整合到基因组上)问题
我在做代谢调控,用的大肠杆菌,因为涉及到过表达的基因太多了,想整合到染色体上面过表达。我先用质粒过表达效果明显,但是一整合到基因组上以后就没有用了。换了启动子,比如T7启动子也没有用,就算加IPTG诱导也不行。想问问大家有成功利用基因整合方法过表达的吗,我不知道是因为敲入压根不行,还是我自己的实验设计和操作哪个环节不对。急!!已经被困了好几个月了!
我在做代谢调控,用的大肠杆菌,因为涉及到过表达的基因太多了,想整合到染色体上面过表达。我先用质粒过表达效果明显,但是一整合到基因组上以后就没有用了。换了启动子,比如T7启动子也没有用,就算加IPTG诱导也不行。想问问大家有成功利用基因整合方法过表达的吗,我不知道是因为敲入压根不行,还是我自己的实验设计和操作哪个环节不对。急!!已经被困了好几个月了!
