一个简洁高效的的慢病毒浓缩的方法
发布于 2022-10-19 · 浏览 2699 · IP 上海上海
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方法参考Jiang, W., Hua, R., Wei, M. et al. An optimized method for high-titer lentivirus preparations without ultracentrifugation. Sci Rep 5, 13875 (2015). https://doi.org/10.1038/srep13875 （亲测可行）
步骤：
- 病毒包装，收集48h以及72h的病毒上清，1000g，10min离心，取上清，过0.45uM滤头。
- 配置10%蔗糖液（(50 mM Tris-HCl, pH 7.4,100 mM NaCl, 0.5 mM ethylene diamine tetra acetic acid [EDTA]，10% surcose) ，高压灭菌。
- 离心管底部加入1V的10%蔗糖液，然后上次小心加入4v的病毒上清。20000g（作者测试了10000-90000g，增加转速并不会显著增加滴度，推荐10000g即可，保险起见我采用了20000g），4℃，4h离心。
- 离心完毕可见底部白色团块，小心去除上清，加入DMEM培养基过夜轻轻吹打，过夜后分装液氮速冻后存放于-80℃。（我的测试用了15mL病毒上清，最后用500uLDMEM溶解）
结果：
- 1mL原液（感染48h）
- 浓缩后用50uL（24h）
最后编辑于 2022-10-19 · 浏览 2699
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