MTT用的96孔培养板，为什么同一组的两孔细胞数差别巨大
发布于 2022-08-26 · 浏览 1353 · IP 浙江浙江
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Q：MTT用的 96 孔培养板，同一组的两孔细胞数差别太大，那些原因能引起，应该如何改进？
A1：1.铺板是否均匀。2.吸出mtt时，是否把底板的细胞也吸出来了，3.加入的dmso是否够量
A2：1.在加细胞时，细胞沉淀下来，导致两孔细胞数不同。我们通常用磁力转子对细胞缓慢搅拌，时刻保持细胞处于悬浮状态。
2.96 孔板在培养箱中，由于湿度不够，而培养箱由于具有一定的温度，使得边缘的孔水分蒸发较快，导致培养基中各种成分浓度变化增大，导致细胞状态不同。对于这种现象，要保证培养箱中的湿度，减少开关培养箱的次数和时间。
对于生长较快的细胞，例如每 12 小时到 24 小时就传代一次的细胞，应该起始浓度低一些，我一般是96孔板每孔加10 4个细胞，培养液每孔加 200ul。
有些细胞生长较慢，例如72小时才传代一次，或者是原代细胞，起始浓度应高一些，我一般是 96 孔板每孔加 2X10 4 个细胞，培养液每孔加 200ul。
Q：细胞水平要做WB，多少细胞提的蛋白够做WB？跟细胞类型有关吗？
A1：对，有的细胞蛋白含量高，有的低一些，但是一般 12 孔板的一个孔就足够跑 1-2 次wb了，但是一般大家都是用六孔板长满来提，防止操作过程中，蛋白浓度低，或有操作丢失。
A2：一般 5×10^6 就足够了;特殊情况需根据自己的研究来确定。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1353
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