细胞冻存液DMSO浓度是10％还是20％？
发布于 2022-08-23 · 浏览 4233 · IP 浙江浙江
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Q：很多帖子说冷冻保护液：一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份DMSO混合而成，即DMSO浓度为10％。还有说，加入培养基、 40% 血清，逐滴加入二甲基亚砜（ DMSO ）至 20% 浓度，即制成双倍的冻存液；，再取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液。即最终细胞混合液中DMSO浓度是10％。到底该怎么配 细胞冻存液？
A：DMSO不能超过10%，因为有细胞毒性，一般都采用10%，血清一般用30%到40%，当然再多一点血清也没有坏作用，只是浪费而已。
一般来说，DMSO：血清：培养基的体积比为1：3：6或1：4：5。
冻存液最好现配现用，不易放的时间过久（一般不超过一个月）。但刚配好的冻存液会产热，需放置一会才能用于悬浮细胞。
冻存细胞（以50ml培养瓶）时，先将冻存液按DMSO：血清：培养基的体积比按1：4：5配好，再处理细胞，一般先用PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，合成培养基悬浮细胞后，1000RPM离心5分钟，弃上清，将细胞沉淀用1ml冻存液悬浮，转移至冻存管，作标记后脱脂棉包裹，可直接放于-80℃冰箱，改日（一般应在三个月内）移于液氮罐中。
Q：细胞冻存液是否对细胞贴壁有影响
A1：不知道你复苏培养使用什么规格的瓶子，因为商品化冻存液中应该也有 DMSO，对细胞影响较大的也是这个成分。足量的稀释可以降低他的毒性。
A2：传统的冻存方法冻存步骤繁琐，推荐使用无血清细胞冻存液。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 4233
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