贴壁细胞传代

新手小白刚刚开始做细胞实验，记录一下自己的操作和学习过程，希望自己可以在这不断的总结和摸索中前进！各路大神有注意到我的操作问题可以帮我纠正呀~感谢

细胞：L929

实验操作：

准备工作：

FBS、0.25%EDTA-胰酶、双抗 -20℃冰箱4℃解冻

实验器具生物安全柜紫外杀菌30min

DMEM高糖培养基、无菌PBS缓冲液、FBS、0.25%EDTA-胰酶、双抗 37℃水浴 20min

配制完全培养基（90%DMEM培养基+10%FBS+1%双抗）

贴壁细胞传代：

1.    吸出培养瓶中原本的培养基并丢弃。

2.    2ml无菌PBS沿侧壁加入，缓慢冲洗 2次

3.    加入 1ml 0.25%EDTA-胰酶 轻轻晃动培养瓶 进行解离

4.    37℃孵育解离 2min，显微观察解离情况 30秒观察一次，可轻轻拍打培养瓶加快解离

5.    解离程度达到90%时（细胞大多变成小圆球）加入完全培养基 2ml，轻轻吹打，终止消化

6.    将培养瓶中的细胞悬液转移至15ml离心管中，1000rpm 离心5min 弃上清

7.    加入新的培养基 2ml 重悬细胞，轻吹为细胞悬液

8.    吸取相应体积细胞悬液分装进入新培养瓶， 在培养瓶中补足培养液 T25 瓶子需4-5ml

9.    放进CO₂培养箱 37℃ 5%CO2进行培养

小白疑问：

传代比问题--传代比是指最后传了几个瓶子呢还是自己传代时细胞悬液和完全培养基的比例呢？例如2ml细胞悬液，分别吸1ml细胞悬液至T25瓶子，加入4ml培养基，传代了两瓶。这样操作的传代比是多少呢？