dxy logo
首页丁香园病例库全部版块
搜索
登录

A7R5细胞传代后死亡

发布于 2022-06-12 · 浏览 2672 · 来自 Android · IP 辽宁辽宁
这个帖子发布于 2 年零 325 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我是科研小白,向各位请教,求助!最近开始养细胞。小鼠血管平滑肌细胞细胞养的很好,一天长满。大鼠血管平滑肌细胞(A7R5)一直养不好。A7R5长的慢,BI品牌的EMDM+10%FBS+双抗培养。复苏4天后长80%,见下图。

img

然后第4天开始传代,首先弃去培养液,pbs洗2次,1ml0.25胰酶消化8min,镜下观察形态变化,漂起部分后(以前消化3min也长不好,传代细胞密度低),2倍培养液终止消化,1000r5min离心,弃上清,培养液重悬,1:2传代。下图是传代后10h状态。

img

下图是传代24h状态

img

10×

img

40×

img

40×

高倍镜下看,背景很脏,细胞之间很多小黑点像是细胞碎片,凋亡小黑点,贴壁不动,很多细胞好像逐渐裂解。

传代后养好多天细胞不长,小黑点越来越多,细胞形态不好,状态不佳,不知道哪里除了问题。

以下是小鼠,同样操作,同样试剂,长的很好。

img


img

请问各位,可能是哪里出了问题,有没没办法挽救!(ps:同门也养这个细胞,他们是复苏困难,几次才能活一次,一旦活了,传代没问题,过得很好。我们复苏一次活一次,传代后状态不佳,慢慢都死了,用的一样的BI的培养液血清,孵箱37℃,5%CO2)。

求救求救!谢谢谢谢!欢迎探讨!

最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2672

9 6 1

全部讨论0

默认最新
avatar
9
分享帖子
share-weibo分享到微博
share-weibo分享到微信
认证
返回顶部